暗视野显微镜原理

　　暗视野显微镜（dark field microscope）的原理主要基于丁达尔（Tyndall）光学效应，并在普通光学显微镜的结构基础上进行改造而成。以下是暗视野显微镜原理的详细解释：

　　一、基本原理

　　丁达尔效应：当一束光线透过黑暗的房间，从垂直于入射光的方向可以观察到空气里出现的一条光亮的灰尘“通路”，这种现象即丁达尔效应。暗视野显微镜正是利用这一原理，通过特殊的光学设计来实现对微小物体的观察。

　　二、光学设计

　　聚光镜中央的挡光片：暗视野显微镜的聚光镜中央设计有挡光片，这一设计使得照明光线不能直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜。因此，视野的背景是黑暗的，而物体的边缘由于反射或散射光线而显得明亮。

　　光线路径的改变：由于挡光片的存在，光源的中央光束被阻挡，不能由下而上地直接通过标本进入物镜。光线被迫改变途径，倾斜地照射在观察的标本上。标本遇光后发生反射或散射，这些散射的光线随后进入物镜，形成观察图像。

　　三、观察效果

　　高对比度观察：由于视野背景是黑暗的，而物体边缘是明亮的，这种高对比度的观察方式使得微小物体在暗视野中更加清晰可见。

　　高分辨率：暗视野显微镜能够观察到小至4~200nm的微粒子，其分辨率比普通显微镜高50倍。这使得它在观察微小生物、颗粒等方面具有独特的优势。

　　四、应用范围

　　未染色透明样品的观察：暗视野显微镜常用于观察未染色的透明样品，如细菌、病毒等微生物。这些样品由于具有和周围环境相似的折射率，在一般明视野下难以清晰观察，而暗视野显微镜则能显著提高样品与背景之间的对比度。

　　病原体检查：在临床上，暗视野显微镜还用于检查某些病原体，如苍白螺旋体（梅毒螺旋体）等。这种检查方法对早期梅毒的诊断具有重要意义。

　　五、使用方法

　　使用暗视野显微镜时，需要按照以下步骤进行操作：

　　将暗视野聚光器装在显微镜的聚光器支架上。

　　选用强的光源，但又要防止直射光线进入物镜，因此一般用显微镜灯照明。

　　在聚光器和标本片之间加一滴香柏油，以防止照明光线在聚光镜上进行全反射而达不到被检物体。

　　升降聚光器，将聚光镜的焦点对准被检物体，即以圆锥光束的顶点照射被检物。

　　选用与聚光器相应的物镜，调节焦距，找到所需观察的物像。

　　综上所述，暗视野显微镜通过其独特的光学设计和观察方式，实现了对微小物体的高分辨率、高对比度观察，在生物学、医学等领域具有广泛的应用价值。